Preparación y tinción de muestrasPreparació i tinció de mostresPreparing and staining samples

Para poder observar un grupo de bacterias, normalmente se prepara una muestra en un porta  que será colocado en el microscopio. La preparación de la muestra empieza por la fijación de la muestra al porta y  termina con la coloración de los organismos.

Fijación: proceso por el cual se preservan y se fijan en una posición los microrganismos de la forma más parecida posible a la de las células vivas. Este proceso es necesario para la posterior tinción de la muestra. Fundamentalmente, existen dos tipos diferentes de fijación.

La fijación por calor se utiliza de forma rutinaria para observar procariotas. Normalmente una película de células (un frotis) se calienta suavemente pasando el portaobjetos por una llama. La fijación por calor preserva la morfología global pero no las ultraestructuras.

La fijación química se utiliza para proteger las subestructuras celulares finas y la morfología de los microrganismos más grandes. Los fijadores químicos penetran en la célula y reaccionan con los componentes celulares, normalmente se unen a proteínas y lípidos para inactivarlos, insolubilizarlos e inmovilizarlos. Las mezclas comunes de fijadores contienen sustancias como etanol,  ácido acético, cloruro de mercurio, formaldehído y glutaraldehído.

En este video de YouTube una señora nos explica cómo hacer un frotis desde un cultivo en tubo y, posteriormente, una fijación por calor 

Colorantes y tinción simple: Los numerosos tipos de colorantes utilizados para teñir microorganismos tienen dos características en común: contienen grupos cromóforos, grupos con dobles enlaces conjugados que dan al colorante su color, y pueden unirse a las células por medio de enlaces iónicos covalentes o hidrófobos. La mayoría de colorantes se utilizan para teñir directamente el objeto de interés pero algunos colorantes como la tinta china y la nigrosina se utilizan en  tinciones negativas, en las que lo que se tiñe no es la célula si no el fondo, las células aparecen como objetos brillantes en un fondo oscuro.

Los colorantes que se unen a las células por interacciones iónicas son los más utilizados. El pH puede modificar la eficacia de tinción de estos colorantes ya que la naturaleza y cantidad de cargas en los componentes celulares varía con el pH.

Pero… ¿Cómo se hace una tinción? En este video de YouTube nos lo explican bastante bien aunque, como viene siendo habitual, en inglés:

 

Per poder observar un grup de bacteris, normalment es prepara una mostra en un porta que serà col · locat al microscopi. La preparació de la mostra comença per la fixació de la mostra al porta i acaba amb la coloració dels organismes.

Fixació.

Procés pel qual es preserven i es fixen en una posició els microorganismes de la manera més semblant possible a la de les cèl · lules vives. Aquest procés és necessari per a la posterior tinció de la mostra. Fonamentalment, hi ha dos tipus diferents de fixació: la fixació per calor y la fixació química.

En aquet vídeo se nos explica cómo hacer un frotis desde un cultivo en tubo y, posteriormente, una fijación por calor.

Colorants y tinció simple

Els nombrosos tipus de colorants utilitzats per tenyir microorganismes tenen dues característiques en comú: contenen grups cromòfors, grups amb dobles enllaços conjugats que donen al colorant el seu color, i poden unir-se a les cèl · lules per mitjà d’enllaços iònics covalents o hidròfobs. La majoria de colorants s’utilitzen per tenyir directament l’objecte d’interès però alguns colorants com la tinta xinesa i la nigrosina s’utilitzen en tincions negatives, en les que el que es tenyeix no és la cèl · lula sino el fons, les cèl · lules apareixen com objectes brillants en un fons fosc.

Els colorants que s’uneixen a les cèl · lules per interaccions iòniques són els més utilitzats. El pH pot modificar l’eficàcia de tinció d’aquests colorants ja que la naturalesa i quantitat de càrregues en els components cel · lulars varia amb el pH.

Però… Com es fa una tinció? En aquet video  ens ho expliquen prou bé encara que, com és habitual, en anglès

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To observe a sample of microorganism, they usually prepare the sample in a slide, which will be place in the microscopy. The preparation of the sample starts fixing it in the slide and ends with the stain of the microorganism.

Fixation

In this process structures and cells will be preserved and fixed in a permanent position in the closest shape to the living cell. This step is necessary to the stained of the sample. There are two different types of fixation: Heat fixation and chemist fixation

This video shows how make a heat fixation and smear from a tube culture.

Biological Stains and simple staining

There are many different biological stains but they have two common characteristics: All contain  chromophore groups, this groups contains  conjugated double bonds that give their specific colour; and can join to the cells by ionic or hydrophobic bonds. Most of these dyes are used to stain the microorganisms but some of they, like chinese dye and nigrosina are used on negative stain, which involves stain the background not the microorganism. The cells appear like bright objects in a dark background.

The dyes that link cells by ionic interactions are the most used. The efficiency of the dyes can be modify by pH. That is because the number and type of the cellular charges can be also modify by the pH.

But… ¿How we make a stain? In this video you can see and explanation of this method.

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