Sistemas miniaturizados

Una de las tendencias actuales en muchas áreas del conocimiento, incluida la microbiología, está dirigida hacia la miniaturización, automatización,   simplificación, el ahorro de reactivos  y la disminución de desechos.

Los sistemas miniaturizados son métodos rápidos que permiten la identificación de microorganismos a través de la realización de diferentes pruebas bioquímicas. Estos sistemas consisten en un dispositivo de plástico con varios microtubos que contienen diferentes medios de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba que se requiere montar. El sistema que utilizamos en las prácticas es el sistema API  20E, aquí un resumen, pero también existen otros sistemas como este.

Si una imagen vale más que mil palabras, 3 vídeos valdrán mucho más. A si que aquí tenéis una explicación en vídeo del uso del sistema API:

Tinciones diferenciales: Tinción de Gram

 Procedimiento que se utiliza para diferenciar organismos en base a sus distintas características tinción. La tinción de Gram es el método de tinción más ampliamente utilizado en bacteriología.

El primer paso consiste en teñir el frotis con cristal de violeta (colorante básico), el colorante primario. A continuación  se trata con una solución yodada que actúa como mordiente. El yodo intensifica las interacciones entre el colorante y la célula de manera que esta se tiñe más intensamente. Posteriormente se decolora el frotis lavándolo con acetona o etanol. Así las bacterias gramnegativas perderán la coloración sin embargo, otras retienen el cristal de violeta, las bacterias grampositivas. Finalmente el frotis se tiñe de nuevo, tinción de contraste, con un colorante básico de un color diferente al del cristal de violeta. La safranina, el colorante de contraste más común tiñe las bacterias gramnegativas de rosa a rojo.

SERAMIX EN BIOGRADO 2013

Los miembros de Seramix, junto con los de A-probando la evolución y EduCactus, hemos sido invitados a participar en una mesa redonda dentro del congreso de Biología “Biogrado 2013”. El acto tendrá lugar el miércoles 22 de mayo a las 11:00 h. en el salón de actos de la facultad de Farmacia, en nuestro campus de Burjassot. Os animamos a asistir si queréis conocer mejor nuestro proyecto.

Preparación y tinción de muestras

Para poder observar un grupo de bacterias, normalmente se prepara una muestra en un porta  que será colocado en el microscopio. La preparación de la muestra empieza por la fijación de la muestra al porta y  termina con la coloración de los organismos.

Fijación: proceso por el cual se preservan y se fijan en una posición los microrganismos de la forma más parecida posible a la de las células vivas. Este proceso es necesario para la posterior tinción de la muestra. Fundamentalmente, existen dos tipos diferentes de fijación.

La fijación por calor se utiliza de forma rutinaria para observar procariotas. Normalmente una película de células (un frotis) se calienta suavemente pasando el portaobjetos por una llama. La fijación por calor preserva la morfología global pero no las ultraestructuras.

La fijación química se utiliza para proteger las subestructuras celulares finas y la morfología de los microrganismos más grandes. Los fijadores químicos penetran en la célula y reaccionan con los componentes celulares, normalmente se unen a proteínas y lípidos para inactivarlos, insolubilizarlos e inmovilizarlos. Las mezclas comunes de fijadores contienen sustancias como etanol,  ácido acético, cloruro de mercurio, formaldehído y glutaraldehído.

En este video de YouTube una señora nos explica cómo hacer un frotis desde un cultivo en tubo y, posteriormente, una fijación por calor 

Colorantes y tinción simple: Los numerosos tipos de colorantes utilizados para teñir microorganismos tienen dos características en común: contienen grupos cromóforos, grupos con dobles enlaces conjugados que dan al colorante su color, y pueden unirse a las células por medio de enlaces iónicos covalentes o hidrófobos. La mayoría de colorantes se utilizan para teñir directamente el objeto de interés pero algunos colorantes como la tinta china y la nigrosina se utilizan en  tinciones negativas, en las que lo que se tiñe no es la célula si no el fondo, las células aparecen como objetos brillantes en un fondo oscuro.

Los colorantes que se unen a las células por interacciones iónicas son los más utilizados. El pH puede modificar la eficacia de tinción de estos colorantes ya que la naturaleza y cantidad de cargas en los componentes celulares varía con el pH.

Pero… ¿Cómo se hace una tinción? En este video de YouTube nos lo explican bastante bien aunque, como viene siendo habitual, en inglés: